Expresión de proteínas
Bloques de contenido
Cell Disruptor – Constant Cell Disruption Systems
NGC FPLC instrument – Biorad
Centrifuge – Beckman Coulter
Contactos temporales
Centros CERCA
Barcelona, Spain
2005
Institut de Recerca Biomèdica (IRB Barcelona)
Propietarios
Equipos y Servicios
Clonación HTP personalizada para generar vectores de expresión. La técnica de clonación independiente de la enzima de restricción y unión In-Fusion™ permite la producción precisa de constructos definidos por el usuario, incluyendo la producción de constructos mutantes, quiméricos y bicistrónicos (solo E. coli). Hay muchos vectores preparados pOPIN1 o pPEU In-Fusion™ disponibles; haga clic aquí para descargar la lista más reciente o contáctenos. La mayoría de estos vectores permiten la expresión en E. coli (promotores basados en T7), células de mamíferos (potenciador temprano inmediato de CMV fusionado al promotor de ß-actina de pollo) o células de insectos. (promotor p10 y recombinación intracelular de ORF 603 y 1629). con genoma baculoviral). Generalmente, se espera que el investigador proporcione la "plantilla" para las operaciones de clonación, pero la instalación también puede obtener plásmidos o ADNc. Cribado de expresión en E. coli Una placa de microtitulación de 96 clones de expresión (instalaciones del usuario o derivados) en E. coli puede examinarse en aproximadamente una semana. Actualmente, el cribado consiste en el uso de dos cepas de expresión, y la expresión en cada cepa se prueba mediante IPTG y métodos de autoinducción. Se pueden incorporar cepas de E. coli (DE3) adicionales al proceso de cribado si es necesario. Minipreparación de plásmido HTP: 96 minipreparaciones de pellets de E. coli en formato MTP en menos de dos horas Expresión de proteínas personalizadas y purificación de proteínas intracelulares o secretadas a escala de miligramos Un mínimo de dos pasos de purificación generalmente nos proporciona purezas proteicas superiores al 95% para la mayoría de las proteínas. Los huéspedes actualmente disponibles para cultivos de expresión a gran escala son E. coli y células HEK293T y actualmente estamos introduciendo cultivos de células de insecto a gran escala a nuestra lista de servicios. El sistema de células HEK293T se ha utilizado para producir con éxito cantidades de miligramos de proteínas glicosiladas secretadas. Producción de proteínas marcadas con selenio-metionina en cepas de E. coli auxotróficas o prototróficas para la determinación de la estructura cristalográfica Nuestra compra al por mayor de selenio-metionina produce precios muy competitivos para nuestras proteínas marcadas con E. coli. Producción de proteínas marcadas con 15N, 13C o deuterio en cepas de E. coli auxotróficas o prototróficas para el cribado de expresión por RMN en células de mamíferos (p. ej., HEK293T). Se puede examinar en las células una placa de microtitulación de 96 clones de expresión (derivados de la instalación o del usuario) en 1-2 semanas. Producción de baculovirus recombinantes utilizando conjuntos de vectores pOPIN o pPEU o a partir de construcciones existentes (p. ej., pFastBac). La recombinación en la célula (Sf9) de los vectores pOPIN y pPEU con el genoma baculoviral es rápida e ilimitada. Las proteasas recombinantes marcadas con His 3C (PreScission), TEV y SUMO están disponibles para la eliminación de las proteínas de fusión de las proteínas expresadas. También esperamos que las glicosidasas recombinantes PNGasa y EndoF1 estén disponibles para la eliminación de fragmentos de azúcar de las proteínas recombinantes glicosiladas antes de la cristalización. El centro también obtiene numerosos reactivos de alta calidad, desde cepas celulares especializadas de E. coli competentes y reactivos para la expresión de proteínas hasta reactivos de marcaje y clonación para uso de investigadores individuales. La adquisición de reactivos a través de los centros suele ser muy rentable.
Categorización
Dominios RIS3CAT y otros
GINYS-IRB-003
Procedimiento de acceso y tarifas
Calidad Institucional
